人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因，全长为173个核苷酸，它被分成8个寡核苷酸，分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接，然后被克隆到噬菌体M13mpl8中，克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测，证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载休YFD59 HindⅢ位点中，建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFDl04，再将此质粒转化酿酒酵母，所得转化子经摇瓶发酵，发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。