采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子，在克隆的全良cDNA的5’端有480bp的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺失突变方法，删除了这一非编码区及信号肽序列，并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG)，形成一个限制酶NcoI的识别位点ccATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的Nc0I—Pst I片段，插入到原核表达载体pBv220中，获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明，肿瘤坏死因子的表达量可达3．42×10。Μ／L菌液。sDs－PAGE电泳凝胶扫描结果显示，肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22．8％。抗呻瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。sD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。