链霉菌M1033 D－木糖异构酶的分子克隆

链霉菌M1033染色体DNA经BamH Ⅰ酶解后电泳，Southern转移。根据自测的链霉菌M1033 D－木糖异构酶氨基酸序列设计合成寡聚核苷酸探针x－2、x－3，以x－2、x－3及Am－pullariella sp3876 D-木糖异构酶基因(1．17kb)为探针进行杂交，确定与上述探针杂交最强处在15kb左右。从胶上分离出g-20kb大小的片段，克隆到EMBL 3载体中，经杂交筛选后，得到0．6％的阳性噬斑，其插人大小为13kh。将插入DNA的saIⅠ酶解片段(2．5kb)进一步亚克隆于pucl8，得到重组质粒puB l，经酶解图谱、部分序列分析和互补实验确定puBl含有完整的M1033 D-木糖异构酶基因