Cryopreservation of Eriocheir sinensis sperms (In vitro) with different cryoprotective solutions and prefreezing time
冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响

本文以甘油、二甲亚砜（DMSO）为冷冻保护剂，采用两步降温法，以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标，研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子，液氮冷冻保存8h以上，精子保存密度为10^7个／mL，伊红染色法检测精子存活率，单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA损伤。实验共设置10个组，分别为不同浓度的单一冷冻保护剂（每种保护剂的体积百分比分别为5％、10％、12．5％、15％）和两种保护剂组合（两种保护剂在同一实验组巾的体积百分比含量均为5％、10％）。结果显示，12．5％甘油的保存效果最佳，精子存活率达到62．60％。在此基础上，以10％甘油作为冷冻保护剂，设置5、10、20、30、40min5个时间梯度，研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著，当预冷时间低于20min时，精子大量死亡，且精子DNA严重损伤；当预玲时间超过30min时，精子存活率明显提高，精子DNA损伤明显减弱。