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小麦叶片蛋白质组分析中高丰度蛋白rubisco酶的快速去除方法研究

, PP. 223-228

Keywords: 蛋白质组,小麦叶片,分离技术,western,blot,双向电泳

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【目的】建立一种小麦叶片蛋白质组分析时去除全蛋白提取物中高丰度蛋白rubisco酶的方法,为富集低丰度蛋白,提高双向电泳灵敏度提供技术支持。【方法】采用分离技术,以铭贤169小麦苗期叶片为材料,使用不同浓度(1,2,5,10mmol/l)的肌醇六磷酸钠,结合二水氯化钙在不同温度(4,20,37℃)去除小麦叶片蛋白中的rubisco酶,筛选去除小麦叶片蛋白rubisco酶的最佳条件,并采用一维凝胶电泳(1-de)、westernblot方法检测去除rubisco酶的有效性,用二维凝胶电泳(2-de)评估该方法对样品在二维凝胶上分辨率的影响。【结果】在37℃条件下,采用10mmol/l肌醇六磷酸钠结合10mmol/l的二水氯化钙去除小麦叶片蛋白中的rubisco酶,可以获得较好的去除效果。在上述条件下作用10min,小麦叶片水溶性蛋白提取物中超过80%的rubisco酶得以沉淀去除,二维电泳图谱上有更多的低丰度蛋白点显现,且水平条纹明显减少,分辨率有所提高。【结论】得到了一种用于小麦叶片蛋白质组分析时去除高丰度蛋白rubisco酶的方法,该方法具有快速、高效、成本低的特点。

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