实用wssv定量检测方法的建立及其应用于脊尾白虾病毒感染规律的研究

为优化当前白斑综合征病毒(wssv)定量检测方法,实验结合当前wssv诊断与定量方法应用的实际,试图通过设计两对普通pcr引物来建立一种实用的wssv绝对定量方法,并利用此方法进一步探明wssv在脊尾白虾体内的增殖规律及致病性。首先根据wssv的囊膜蛋白vp28基因序列设计了两对特异引物(f1,r1)和(rf2,rr2),分别用于标准品质粒的构建和扩增子的扩增,以开展sybrgreen染料法定量检测wssv的研究;随后利用该定量检测方法分析了wssv在脊尾白虾体内的组织分布及感染规律。研究结果显示:(1)以定量引物rf2和rr2建立的sybrgreen绝对定量检测方法具有敏感度高、特异性强、定量范围广且准确等特点;(2)wssv能感染脊尾白虾鳃、肝胰腺、肌肉、头胸甲下结缔组织、胃及肠等组织,其中头胸甲下结缔组织病毒含量最高(1.1×107copies/μg),其次是鳃组织(4.1×106copies/μg);正常脊尾白虾感染wssv,首先经过一个约48h潜伏期,而后开始大量增殖并造成部分虾死亡,死亡率约为20%。