罗汉果葡萄糖基转移酶基因sgugt4的克隆及表达研究

以授粉后70d的罗汉果为材料，采用rt-pcr和race技术克隆到一个葡萄糖基转移酶基因，命名为sgugt4。该基因cdna全长1726bp，包含完整的开放阅读框1344bp，编码447个氨基酸。构建pet32a-sgugt4原核表达载体，转化大肠杆菌rossetta-gami（de3），经iptg诱导获得分子量约65kd的目的基因融合蛋白。系统进化分析表明，sgugt4与具有罗汉果苷合成活性的拟南芥和甜叶菊葡萄糖基转移酶atugt73c3、atugt73c5、atugt73c6、srugt73e1聚在一个亚家族。实时荧光定量pcr检测表明，sgugt4在罗汉果甜苷ⅴ主要积累部位果肉的表达量高于茎、叶、花和果皮，在根和种子中几乎不表达；果实发育40~50d，甜苷ⅴ开始积累，sgugt4表达量则逐渐升高，50d时急剧上升；甜苷ⅴ含量越高的品种，sgugt4表达量也越高。sgugt4可能在罗汉果甜苷ⅴ生物合成过程中发挥作用。