人DNase I的表达、纯化及降解NETs活性研究

为获得纯度较高的人脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase I)以研究其对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps，NETs)的降解作用，构建基因工程表达菌E.coli Rosetta(DE3)/pET32a-His-DNase I，乳糖诱导表达，经镍柱亲和纯化获得融合蛋白His-DNase I。提取小鼠中性粒细胞，用佛波酯PMA刺激形成NETs，SytoxGreen及荧光显微镜检测融合蛋白对NETs的降解活性。结果表明，成功构建人DNase I基因克隆并在原核细胞中实现高效表达，纯化的His-DNase I具备较高的核酸酶活性。本研究为进一步探究DNase I的临床应用奠定了理论基础