一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法

为了提高胰岛素前体 (PI) 的产量，构建了pPIC9K-PI表达载体并电转化至毕赤酵母菌株GS115中，在浓度为4.0 mg/mL的G418抗性平板上筛选到了1株拷贝数为12的菌株CL012。将SNAREs (可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子受体蛋白) 组分中的SNC2和SNC2-SSO2分别转入菌株CL012中，并在摇瓶和5 L发酵罐水平上检测SNAREs对PI产量的影响。结果表明：摇瓶水平上，甲醇诱导96 h后，菌株CL012的PI产量为1.53 mg/L；表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别为1.89 mg/L和2.21 mg/L，分别比菌株CL012提高了23.53%和44.44%。在5 L发酵罐上进行高密度发酵，甲醇诱导96 h后菌株CL012的PI产量为53 mg/L，是摇瓶水平的34.64倍；表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别达到64 mg/L和78 mg/L，分别比菌株CL012提高了20.75%和47.17%。由此得出结论SNAREs可以促进胰岛素前体的分泌，从而提高在毕赤酵母中的异源表达