基于抗坏血酸过氧化酶的电镜成像和活细胞邻近标记方法的应用进展

Alice Ting实验室开发的抗坏血酸过氧化物酶(engineered ascorbate peroxidase，APEX)，相对于经典的辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase，HRP)，其酶活性不再受细胞内蛋白质定位的影响，可以在几乎所有的亚细胞区域保持活性，这使其在研究亚细胞尺度以及活细胞水平生物学问题时极具优势．目前，基于APEX的二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)染色标记技术已经成功地实现对全细胞、亚细胞器和蛋白质水平的电镜成像．同时，与质谱技术结合，基于APEX的活细胞生物素邻近标记方法也极大地推动了亚细胞器蛋白质组学，以及目标蛋白在特定时空条件下邻近蛋白质组学的研究发展．本文将从以上两个方面阐述APEX技术的基本原理及最新应用进展，并讨论和展望其在实际应用中存在的局限性和挑战