Red 重组介导大肠杆菌外膜蛋白 A 缺失突变菌株的构建及生物学特性初步研究

目的 利用 Red 同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白 A （outer membrane protein-A， OmpA）基因缺失株，为后续研究奠定一定的基础。 方法 以已知大肠杆菌 OmpA 为靶点在其两端设计同源臂引物，以质粒 pKD3 为模板利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增出氯霉素筛选标记序列，然后采用 Red 重组技术利用质粒 pKD46 诱导表达的重组酶通过电击的方法把外源构建打靶片段导入大肠杆菌，构建大肠杆菌 OmpA 基因缺失突变株。以菌落 PCR 方法检测基因大小，以蛋白质印迹法检测蛋白表达情况，以重组菌株培养过程的吸光度（ A 600 ）值来反映重组子的生长情况。 结果 成功构建了大肠杆菌 OmpA 基因缺失突变株，通过蛋白质印迹法检测和细菌生长曲线测定，发现 OmpA 基因成功完全丢失，突变株的生长曲线与野生型的差异不显著。 结论 OmpA 基因缺失对大肠杆菌的生长无显著影响，为进一步研究疫苗活载体提供了一定基础