在酿酒酵母中共表达sXYLA和XKS1及木糖发酵的初步研究

摘要 为改善重组酵母发酵木糖生产乙醇的能力,将定点突变改造后的Thermus thermophilus木糖异构酶基因sXYLA克隆到酵母表达载体pYX212并用于转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae YPH499进行表达研究.酶活检测表明,改造后的木糖异构酶活性是未改造的1.91倍.在此基础上将改造后具有良好特性的木糖异构酶基因sXYLA和来自酿酒酵母的木酮糖激酶基因XKS1耦联,构建得到重组表达质粒pYX-sXYLA-XKS1,在酿酒酵母YPH499中实现组成型共表达.结果表明,在84h时重组菌发酵液酶活达到最高,木糖异构酶为0.624U/mg蛋白,木酮糖激酶为0.688U/mg蛋白.以葡萄糖和木糖为混合碳源初步进行半通氧发酵,代谢产物分析表明酿酒酵母重组菌木糖的消耗为4.75g/L,乙醇的产量为0.839g/L,分别比出发菌提高20.9%和14.8%,为酿酒酵母利用木糖发酵乙醇奠定基础