谷氨酸生产菌S9114中依赖于NADPH谷氨酸脱氢酶的纯化及性质

摘要 利用DEAE-纤维素离交柱层析、疏水柱层析和凝胶过滤层析等从谷氨酸棒杆菌S9114中分离纯化出依赖于NADPH的谷氨酸脱氢酶(GOH-NADPH).经HPLC测定,该酶的分子量为188ku;经SDS-PAGE电泳测得该酶的亚基分子量为32ku.提示该谷氨酸脱氢酶由6个亚基组成.该酶对NADPH具有高度专一性,在pH 7.5、37 ℃下,以α-酮戊二酸、NH4Cl和NADPH为底物时的米氏常数Km分别为9.22 mmol/L、52.7 mmol/L和2.31×10-3mmol/L.最适反应pH为7.5,最适反应温度为42 ℃,并对热比较稳定.此外,KCl对GDH-NADPH的活性具有激活作用