耐热普鲁兰酶CBM68结构域中关键位点对其酶学性质的影响

摘要 通过对Anoxybacillus sp.LM18-11来源的耐热普鲁兰酶(PulA)与麦芽三糖共结晶的晶体结构分析,在新命名的底物结合域CBM68中预测出4个与底物结合有关的氨基酸位点(Y14、D16、K62和R96),分别将4个氨基酸位点突变为丙氨酸,得到突变体PulAY14A、PulAD16A、PulAK62A和PulAR96A.其中,突变酶PulAY14A和PulAR96A的底物结合力及催化效率与野生酶PulA相比均有明显降低,其Km值分别比PulA提高了4.2倍和2.5倍,kcat/Km分别为PulA的29％和37％.同时,PulAY14A和PulAR96A的最适作用温度均降低了10℃,PulAR96A的最适作用pH也降低了0.5个单位.说明Y14和R96是CBM68结构域中的关键氨基酸位点,这两个位点的发现为进一步探究CBM68结构域的作用机制奠定了基础