来源于Paenibacillus campinasensis SK13.001的β-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的表达和反应条件优化

摘要 以1株来源于Paenibacillus campinasensis SK13. 001的基因组为模板,通过PCR扩增获得编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-22b(+)中,转化 Escherichia coli BL21(DE3),经过摇瓶发酵,得到该酶的环化活力为15 U/mL;通过单因素实验对该酶转化淀粉生产环糊精的反应条件进行优化。结果表明,当底物为质量浓度30 g/L的玉米淀粉,反应液pH值为7.0的磷酸盐缓冲液,温度55 ℃,加酶量5 U/g干淀粉,反应时间8 h,环糊精的转化率达到45. 63%,3种环糊精的质量比为α∶β∶γ=7∶75∶18。通过对该酶反应的工艺条件进行优化,为环糊精的工业化生产提供参考