指状青霉cyt b5和cyt b5r基因克隆及与cyp51A表达

摘要 为探究指状青霉细胞色素b5（Cyt b5）与细胞色素b5还原酶（Cyt b5r）在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用,研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制;并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得了cyt b5与 cyt b5r基因,分别命名为HS-Pdcyt b5和HS-Pdcyt b5r。以多基因串联克隆载体pPICZαA为骨架构建了指状青霉共表达质粒ppbrA（pPIC-Pdcyp51A-cyt b5-cyt b5r）;电转化法将重组质粒ppbrA导入毕赤酵母X-33中。qRT-PCR分析结果显示,CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达后,其基因表达水平升高54%-97%,并维持较长时间（48-72 h）。表明Cyt b5-Cyt b5r系统可将电子高效转移给CYP51A,从而增强cyp51A基因的转录表达。从指状青霉中克隆表达HS-PdCyt b5和HS-PdCyt b5r蛋白,并通过共表达的方式研究cyp51A基因的功能尚为首次报道