毕赤酵母电转化方法的探索

摘要 旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率。采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量，在不同的电压下进行转化，计数转化后在平板上产生的克隆数，通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率。 研究表明，用0.1 mol/L LiAc，0.01 mol/L DTT，0.6 mol/L sorbitol，0.01 mol/L Tris-HCl处理细胞可获得最佳转化效率；质粒DNA用量为10 ng时转化效率最高。使用0.1 cm电转杯，采用0.6 kV电压，对80 μL细胞进行转化，转化效率最高，可达9.6×105/μg DNA；而使用0.2 cm电转杯，采用1.1 kV电压，对150 μL细胞进行转化，转化效率最高，可达8.8×105/μg DNA。采用优化后条件，用10 μg pPIC9K质粒DNA转化GS115，可获得1.1×106个转化子。此外通过对3种常用毕赤酵母载体转化效率的比较，发现pPIC9K的转化效率约是pPICZαA的160倍，是pGAPZαA的2 900倍。采用优化后的转化条件，毕赤酵母的电转化效率从103-4提升到了106。采用单个电转杯最多可获得1.1×106个转化子