毕赤酵母新启动子GCW14 在细胞表面展示CALB 中的应用

摘要 以毕赤酵母内源壁蛋白Gcw14p 为锚定蛋白，分别以新的内源组成型启动子PGCW14 与诱导型启动子PAOX1、组成型启 动子PGAP 和PTEF14 种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）展示于毕赤酵母细胞表面，通过检测4 种重组细胞的CALB 酶活比 较这4 个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示，PGCW14 的启动子活性与PAOX1 相当，最高菌体酶活力分别在发酵48 h 和168 h 时达到694.8 U/g（Dry cell weight）和684.3 U/g（Dry cell weight），以PGCW14 为启动子的重组菌产酶周期大大缩短；组成型启动子 PGAP 和PTEF1 的最高菌体酶活分别在发酵24 h 和168 h 达到266.7 U/g（Dry cell weight）和449.2 U/g（Dry cell weight），可见PGCW14 的 启动子活力性要高于PGAP 和PTEF1。此外，以PGCW14 为启动子，利用壁蛋白Gcw14p 自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%