转IL-4基因大白菜后代的分子检测及遗传分析

采用PPT抗性筛选、PCR扩增、PCR-Southern杂交、ELISA、Western杂交等方法,对花粉管通道法介导IL-4 基因转化大白菜的后代进行了分子生物学检测,同时结合统计分析手段研究了IL-4 基因在转基因大白菜后代中的遗传规律。结果表明:(1)PPT抗性的转基因大白菜,T4代植株PPT抗性的阳性率为33.43%,IL-4 基因PCR扩增的阳性率为1.39%。IL-4 的分离情况不符合孟德尔分离定律。(2)对T4代5个株系的14个PCR阳性株进行ELISA检测,其中有7份样品为阳性,IL-4表达量约为326.87~1233.13 ng/g FW,同一株系内各株间IL-4的表达量差异显著。(3)Western杂交进一步证实IL-4在转基因大白菜后代中能正常表达。PCR-southern杂交表明IL-4 基因已整合到大白菜基因组中,且在转基因后代植株中仍然存在