抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较

RC28蛋白是从野生蕈类皱盖罗鳞伞中分离得到的新型抗病毒蛋白。前期通过3'-RACE方法，从皱盖罗鳞伞总RNA中克隆获得包含RC28编码区的cDNA，并通过TA克隆获得质粒pMD18-T-RC28。以该质粒为模板，设计特异性引物，PCR扩增RC28片段，分别插入大肠杆菌表达载体pET28a（+）和毕赤酵母表达载体pPIC9K中，形成在N端表达组氨酸标签的重组RC28表达粒体。将这两种RC28表达质粒转化各自的宿主菌后，筛选阳性克隆，构建稳定表达体系。诱导表达后，用SDS-PAGE电泳和Western blot分析RC28的表达情况。放大表达体系后用Ni-NTA柱纯化获得RC28蛋白，并用MTT法测试重组表达蛋白质的抗病毒活性。在实验条件下，大肠杆菌和毕赤酵母中均能表达可溶性重组RC28，纯化后蛋白质得率分别是3.5mg/L发酵液及0.2mg/L发酵液。但抗病毒活性实验表明，大肠杆菌体系表达的RC28蛋白活性较差，而毕赤酵母系统表达的RC28蛋白的抗病毒活性与天然蛋白接近