鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析

为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因（CAV-Apoptin），根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列，将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上，转化至大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质，采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示，成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin，在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物，融合蛋白质分子量大小约为42 kDa，50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白，CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率；显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡，对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活，而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达，且表达产物具有特异抗肿瘤活性