基于mRNA 5'端TIR区二级结构优化提高重组sTNFα RI在大肠杆菌中的表达水平

通过优化PET11b-sTNFαRI 5' mRNA翻译起始区(TIR)二级结构从而提高可溶性肿瘤坏死因子I型受体(sTNFαRI)在大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)]中的表达水平。 通过对PET11b-sTNFα RI mRNA 5'端TIR区二级结构的自由能及核苷酸位置熵分析,设计相应的引物对mRNA 5'翻译起始区(TIR)相应密码子进行突变,从而使核糖体结合位点(RBS)及起始密码子(AUG)暴露于发夹结构之外,此外将pET11b核糖体结合位点由GAAGGAGA突变为GAAGAA,以利于翻译复合体的组装以及翻译起始。通过基因克隆的方法将5'端TIR区优化后的序列与sTNFαRI序列一起克隆到pET11b载体中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测。 通过对PET11b-sTNFα RI 5'TIR mRNA二级结构优化, 经SDS-PAGE和Western blot分析表明重组sTNFαRI的表达水平较优化前提高50%~60%。 通过对重组载体翻译起始区(TIR)mRNA序列的二级结构优化可以有效提高目的蛋白的表达水平,对进一步工业化生产具有重要的应用价值