犬细小病毒VP2基因在枯草芽孢杆菌中的表达及鉴定

摘要 从犬细小病毒/犬瘟热二联苗中提取CPV基因组,根据GenBank发表的CPV-VP2基因序列设计一对引物,对VP2基因进行PCR扩增,并克隆至TA Cloning Kit Dual Promoter(pCRⅡ),获得克隆载体pCR-VP2。将重组质粒亚克隆到枯草芽孢杆菌表达载体pHT43上,获得重组表达载体pHT43-VP2。经双酶切鉴定及序列比对分析后,将pHT43-VP2载体转化入枯草芽孢杆菌WB600中进行诱导表达,产物使用PAGE胶蛋白回收法纯化。结果表明,在69 kD处存在目的蛋白,ELISA检测发现,纯化后的目的蛋白与阳性血清存在特异性反应