枯草杆菌NX-2聚谷氨酸解聚酶的克隆表达及其降解性质研究

利用PCR技术从γ-聚谷氨酸产生菌Bacillus subtilis NX-2的基因组DNA上扩增出聚谷氨酸内切解聚酶基因(ywtD)，克隆后测序，对该基因编码区进行了序列分析，比对结果表明本文扩增的ywtD基因编码与文献报道的序列相似性为99.0%，碱基的差异均表现为碱基取代，仅有一个碱基取代导致编码氨基酸的变化，即第349位密码子由GCC变为GTC。将ywtD基因克隆入表达载体pET15b中，该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，经0.5mmol/L IPTG诱导，外源解聚酶蛋白获得高效表达。利用酶的初提液对聚谷氨酸进行降解，结果显示经72小时解聚酶作用后，γ-PGA分子量从700kDa降到20kDa，此后随作用时间的延长，聚谷氨酸分子量趋于定值