甲型副伤寒杆菌侵袭蛋白(spaO)基因原核表达及免疫性和保护作用研究

目的研究甲型副伤寒杆菌spaO基因重组表达产物rSpaO免疫性和保护作用,并了解甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达情况。方法扩增并克隆甲型副伤寒杆菌临床株 JH01 spaO基因,构建原核表达系统;采用SDS-PAGE分析rSpaO表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集 rSpaO,采用Western blot鉴定其免疫反应性;采用PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株 spaO基因携带和表达频率;观察rSpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,克隆的spaO基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99．45%-99．89%和 99．01%-100%;rSpaO表达量为细菌总蛋白的75%左右;甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rSpaO, rSpaO免疫家兔可产生抗体;94．9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有spaO基因,91．4%(85/93) spaO+菌株表达SpaO。rSpaO灌喂或皮下注射免疫小鼠(500μg)受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率分别为58．3%和50．0%;若加入5μg rLTB,存活率分别上升88．3%和75．0%。结论甲型副伤寒杆菌临床菌株有较高的spaO基因携带率和表达率;rSpaO有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原