中国土拉弗朗西斯菌B型亚种新亚型的发现与溯源分析

目的 对于北京市1例疑似土拉热病例，进行实验室诊断和溯源分析。 方法 2012年7月19日北京市报告1例疑似土拉热病例。从病例血液样本中提取基因组DNA后，采用土拉弗朗西斯菌（土拉菌）3种特异基因（ fopA, tul 4和16 S rRNA ）和两种基因分型引物（C1C4和RD1），进行PCR检测并对扩增子测序。另外两个实验室分别平行进行了 fopA 的PCR扩增和测序。同时采用4个靶位点（ fopA 、 ISFtul 2、23 kDa 和 tul 4）进行荧光定量PCR检测，并采用11个规范的SNP和4个插入/缺失进行系统进化分析。 结果 3种特异基因均得到阳性扩增，测序后得到的片段大小分别为409、407和1 053 bp，经序列比对，显示病例感染的是土拉菌。两种基因分型引物扩增后分别得到了151和924 bp的序列，根据片段长度可判定病例感染的土拉菌为B型亚种。另外两个实验室对于 fopA 的PCR扩增和测序，均得到了阳性结果。4个靶位点的荧光定量PCR检测也均得到了阳性结果， fopA 、 ISFtul 2、23 kDa 和 tul 4位点的Ct值分别为30、25、28和30。系统进化分析显示，本研究中土拉菌和俄罗斯来源的土拉菌聚在一个分支上，为B3亚型。 结论 该病例确定为土拉热病例，本研究在中国发现了土拉菌B型亚种的一个新亚型