三氯乙烯对人正常肝细胞组蛋白质甲基化修饰影响的研究

目的 筛选三氯乙烯(TCE)诱导的人正常肝细胞（L-02细胞）组蛋白异常甲基化修饰，并探讨其在三氯乙烯致肝细胞毒性中的可能作用。 方法 以0、8.0 mmol/L的TCE处理L-02细胞24 h，采用酸法提取组蛋白，通过液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)鉴定和定量分析组蛋白差异甲基化修饰水平，以Western blot验证组蛋白H3K79二甲基化（H3K79 me2）及H3K79三甲基化(H3K79 me3)修饰水平，检测相对表达量。使用单细胞凝胶电泳检测细胞的DNA损伤水平。采用Western blot检测p53与H2AX的磷酸化修饰(?H2AX)的相对表达量。 结果 TCE处理L-02细胞24 h后，质谱鉴定出28个肽段的36个表达有差异的组蛋白甲基化位点；L-02细胞经0、8.0 mmol/L TCE处理后，组蛋白H3K79 me3的相对表达量分别为1.00±0.06、0.70±0.09 ( t= 15.01， P= 0.015)；组蛋白H3K79 me2的相对表达量分别为1.00±0.05、0.74±0.07 ( t= 16.69， P= 0.018) ；DNA损伤的Olive尾距值分别为1.46±0.28、3.12±0.68 ( t= 15.22， P= 0.018)；蛋白p53的相对表达量分别为1.00±0.04、1.24±0.04 ( t= 18.71， P= 0.012)；?H2AX的相对表达量分别为1.00±0.03、1.56±0.11 ( t= 8.32， P= 0.045)。 结论 TCE引起L-02细胞组蛋白中H3K79 me2与H3K79 me3修饰水平发生变化，并且诱导DNA损伤，提示TCE可能通过DNA损伤导致H3K79 me2和H3K79 me3甲基化修饰的变化