黄鳝醛酮还原酶基因的重组表达及多抗制备

为实现原核表达黄鳝醛酮还原酶基因并制备其多克隆抗体，笔者利用基因特异性引物自黄鳝肝脏cDNA中扩增黄鳝醛酮还原酶全长序列，将之克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，构建了重组表达载体；经测序验证后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导。利用Ni离子亲和柱纯化了重组蛋白，通过多次免疫新西兰兔制备了多克隆抗体；采用Western blot和免疫组化法鉴定兔抗醛酮还原酶多克隆抗体的特异性，用间接ELISA技术检测多抗的效价。结果发现成功构建pET/ Eakr原核表达载体，并实现了重组蛋白的融合表达和纯化；Western blot检测表明制备的兔多克隆抗体不仅能特异性地识别来源于黄鳝4种组织的醛酮还原酶蛋白而且还可识别来源于黄颡鱼、团头鲂、乌鳢、鲫鱼和草鱼的同源蛋白。免疫组化结果提示该多抗可特异性识别黄鳝小肠、肝胰组织和脾脏的醛酮还原酶蛋白。制备的多抗效价达1∶6400