高等植物Rubisco的组装及其中间产物的鉴定

将新鲜制备的不含Rubisco的水稻叶片低分子量蛋白组分在离体条件下于室温保温48h,ND-PAGE分析发现在ATP 5mmol/L和Mg~(2+) 5mmol/L的作用条件下,在分子量为560kD位置上有一蛋白带生成。Western blot和SDS-PAGE分析证实在ATP和Mg~(2+)存在的情况下,组装成的蛋白确实是Rubisco全酶;而600kD的蛋白是由Rubisco大小亚基和cpn60的#alpha#、#beta#亚基组成的一个复合物,用~(35)S-Met同位素标记的水稻Rubisco小亚基前体通过跨膜运输与豌豆叶绿体中的大亚基进行异源重组后,发现除了组装成的异源Rubisco杂合酶外,还发现存在有多种组装中间体。根据这些中间体分子量的测定,推测了高等植物Rubisco在cpn60和cpn10作用下完成组装的可能途径。