缺氧肺动脉平滑肌细胞中线粒体ATP敏感钾通道开放对细胞色素C的分布及细胞增殖的作用

为了探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP--sensitive K~(+) channel,mitoK_(ATP))和线粒体膜电位(#DELTA##phi#m)在细胞缺氧信号转导中的作用以及对缺氧肺动脉平滑肌细胞中细胞色素C在细胞内的分布及细胞增殖的影响,该实验将人肺动脉平滑肌细胞进行常氧或24h缺氧培养,并将标本分为六组：(1)对照组；(2)mitoK_(ATP)开放剂diazoxide组；(3)mitoK_(ATP)阻断剂5--HD组：(4)24h缺氧组：(5)24h缺氧+diazoxide组；(6)24h缺氧+5--HD组。利用激光共聚焦显微镜成像法检测#DELTA##phi#m：线粒体/胞浆成分分离试剂盒(BioVision)分离线粒体和胞浆成分后,Western blot检测两者细胞色素C：Western blot检测细胞中caspase--9的蛋白表达量；MTT法及PI染色后流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果显示：(1)diazoxide作用24h后,R--123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase--9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均{sl P}＜0.05；而5--HD作用24 h与正常对照组比较，上述指标无明显变化({sl P}>0.05)。(2)缺氧24 h后，结果与diazoxide组相似，R--123荧光明显增强，细胞胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低，caspase--9的蛋白表达显著减少，细胞明显增殖增多、凋亡减少，与正常对照组相比较，均{sl P}<0.05；24 h缺氧+diazoxide组与缺氧组相比较，R--123荧光明显增强，细胞胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低，caspase--9的蛋白表达显著减少，细胞明显增殖增多、凋亡减少({sl P}<0.05)；而24 h缺氧+5--HD组与缺氧组比较，R--123荧光明显降低，细胞胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显升高，caspase--9的蛋白表达显著增加，细胞明显增殖减少、凋亡增多({sl P}<0.05)。上述结果提示，缺氧可以引起mitoK_(ATP)的开放以及#DELTA##phi#m的去极化，并进而抑制细胞色素C从细胞线粒体释放到细胞浆，抑制线粒体凋亡途径，从而参与并影响肺动脉高压的发生发展。