p38 丝裂素活化蛋白激酶介导低氧预处理诱导的内质网应激相关的心肌细胞保护

：钙网蛋白(calreticulin, CRT)和caspase-12 是重要的内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激分子，本实验在心肌细胞低氧/ 复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)模型上观察低氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC)对CRT 和 caspase-12 表达及活化的影响，探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在HPC 保护机制中的意义及其细胞信号转导机制。原代培养的Sprague-Dawley 乳鼠心肌细胞随机分为6 组：H/R 组、HPC+H/R 组、SB203580+HPC+H/R 组、SP600125+HPC+H/R 组、HPC 组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶 (lactate dehydrogenase, LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况；Westernblot 方法检测CRT 和caspase-12 表达、活化及p38 丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases, MAPK)、c-Jun N-terminal kinase (JNK)磷酸化水平。结果表明：(1) HPC 具有细胞保护作用，与H/R 组比较，HPC+H/R 组细胞凋亡率和LDH 漏出分别降低6.6% 和70.0%，存活率增高6.4%；HPC 前以特异性p38 MAPK 抑制剂 SB203580 预孵育消除HPC的保护作用，与HPC+H/R 组相比，细胞凋亡率和LDH 漏出分别增高5.4% 和2.1 倍，存活率降低5.4%，JNK 特异性抑制剂SP600125 预孵育对HPC 的保护作用无明显影响。 (2) H/R 明显上调CRT 表达(较对照组高8.1 倍)和caspase-12 活性(较对照组高33.2 倍) ；单独HPC 可诱导CRT 表达增多(较对照组高2.6 倍)，但上调程度较H/R 组低60%。H/R 前进行HPC 降低CRT过表达程度(降低72.4%)及caspase-12 活化水平(降低59.6%)。 (3) HPC 前应用p38 MAPK 抑制剂，抑制CRT 表达上调(分别较HPC+H/R 组和HPC 组低63.9% 和71.9%)，并消除HPC 减轻H/R 上调caspase-12 活性的作用(较HPC+H/R 组高7.1 倍) ；HPC 前抑制JNK 活性对CRT、caspase-12 表达和活化均无明显影响。上述结果提示：HPC 可激发适当的ERS，抑制H/R诱导的过度ERS，减少ER 凋亡信号介导的细胞凋亡。p38 MAPK 信号途径在HPC 诱导的ER 应激分子表达、抑制ER 凋亡信号分子活化等机制中发挥重要作用。