抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin, hTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)，利用脂质体Lipofectamine 2000 将包含hTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO 细胞，经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株。将CHO--TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠，应用杂交瘤技术，通过细胞ELISA(cellular enzyme--linked immunoabsorbent assay, CELISA)筛选出阳性克隆后，将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定。作者获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH--1，其亚型为IgG1，McAb腹水效价为1×10~(-6)，腹水抗体含量为20 mg/ml。NH--1对相应抗原具有较高的组织特异性，在体内与正常组织的交叉反应少，对人脐静脉内皮细胞、CHO--TM5有特异性结合反应，说明NH--1可特异性识别天然的hTM分子，为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础。