亚洲棉GAE6-3A上游序列的分离及其在烟草中的表达

根据E6基因保守域设计引物,PCR扩增出亚洲棉(Gossypium arboreum L.)GAE6基因长约400bp片段,序列分析表明该片段与海岛棉(G. barbadense)E6基因同源性达96.8%。进一步合成2个反向引物协助进行PCR-96孔板筛库分离到亚洲棉GAE6-3A克隆。酶切鉴定其插入片段长约8.0kb,序列测定及分析结果表明其上游长约1.5kb。将GAE6-3A上游序列克隆至含有内含子的GUS基因前,构建了植物表达载体。三亲杂交后农杆菌介导转化烟草,组织化学分析显示GUS基因在转基因烟草植株的根、茎、叶的表皮(包括表皮毛)及维管组织表达较强。