基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

[目的]建立基于毛细管电泳的日本落叶松最佳MSAP反应体系，获得条带清晰信号强度均一的DNA甲基化图谱，为今后开展日本落叶松表观遗传变更研究奠定基础。[方法]以日本落叶松未成熟木质部为试材，设置不同梯度的DNA模板用量以及选择扩增体系中引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和exTaq DNA聚合酶浓度，确定各组分不同用量对毛细管电泳效果的影响，从而确立最适的MSAP反应体系。[结果]结果表明模板DNA以及exTaq DNA聚合酶浓度对毛细管电泳结果影响不明显，而高的引物浓度会引起条带的减少。Mg2+及dNTP浓度是影响毛细管电泳结果最为关键的因素，浓度过低或过高会导致毛细管电泳图谱条带明显减少，杂峰显著增多。[结论]最终确立的反应体系为：DNA 模板100 ng，引物0.75 pmol？μL-1，Mg2+ 2 mmol？L-1，dNTP 0.375 mmol？L-1和exTaq DNA聚合酶 0.05 U？μL-1