特异腐质霉来源漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要 漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，在有机农药残留和木质素的降解方面具有潜在的工业价值。从特异腐质霉Y1（Humicola insolens Y1）中分离到了漆酶基因Lac1，其全长1 803 bp，编码600个氨基酸，与NCBI蛋白数据库比对结果表明，与来源于Chaetomium globosum CBS 148.51(XP_001228806)的多酚氧化酶序列相似性最高为71%，表明是一个新的漆酶基因。将其克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9r中，通过PCR和SDS-PAGE检测证实基因已经整合入酵母基因组中且能分泌表达。在3 L发酵罐中，重组Lac1蛋白表达量达到3.79 mg/mL发酵液，酶活性达到1.3 U/mL发酵液。酶学性质分析结果显示，漆酶的最适作用温度为65℃，最适反应pH为4.5，且在pH 6~11的范围内酶的相对活力均在70%以上