鞘氨醇胞菌B1咔唑降解基因carB的克隆与功能研究

摘要 以分离到的咔唑高效降解菌鞘氨醇胞菌B1为材料，研究该菌株咔唑降解基因簇的组成和表达模式，阐释咔唑降解过程中关键酶的作用机理。通过分析不同菌株咔唑降解基因簇中基因的保守区，从菌株B1中成功克隆得到基因簇中carAa、carBa、carBb和carC基因片段。通过RT-PCR证实菌株B1的咔唑降解基因簇为诱导表达。通过同源克隆得到降解关键基因carB和编码两个亚基的carBa、carBb基因，并在大肠杆菌中进行了异源表达。以2,3-二羟基联苯为底物，对CarB粗酶液进行了酶学性质分析。研究表明CarB蛋白催化最适pH和温度分别为7.4和30℃，Fe2+能显著提高酶的催化活力