紫堇灵的分离制备及抗炎活性

旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵，从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制。以80%乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵，UPLC、MS、1H NMR、13C NMR等方法进行纯度及结构鉴定；利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性；采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型，用紫堇灵进行干预，以Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TLR2、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平；进而通过实时荧光定量PCR、Western blot技术分别检测p65 mRNA及细胞核p65表达情况。实验发现，在LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型中，5~40 μmol/L紫堇灵呈正相关下调RAW264.7细胞中TLR4、TLR2蛋白的表达水平，抑制IκBα磷酸化并从基因水平和蛋白水平抑制p65转位入核。结果表明，紫堇灵可能是通过TLRs/NF-κB信号通路发挥对LPS致RAW264.7细胞炎症的抑制作用