枸杞LbMYB103基因克隆及转化拟南芥的研究

以枸杞品种‘宁杞1号’花药为材料，采用 RT-PCR技术，分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框（ORF）的cDNA片段，碱基序列与已知基因HQ415755完全一致。运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103，利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白（GFP）的过表达载体转入洋葱表皮细胞，将LbMYB103基因定位在细胞核。实时荧光定量PCR分析发现，LbMYB103基因在花药中优势表达，果实中表达量较低，在根、茎和叶中均未检测到其转录本，推测LbMYB103基因可能在花药发育过程中起重要作用。通过根癌农杆菌介导法将pMDC83-LbMYB103转入拟南芥（Col-0），经筛选获得T1代抗性再生植株52棵，PCR鉴定有41棵阳性植株，收获T1代种子，经抗性筛选获得T2代抗性植株29棵，PCR鉴定有23棵阳性植株。实时荧光定量PCR分析表明，LbMYB103在拟南芥植株的基因组中正常表达。表型观察发现T1和T2代拟南芥花药发育异常，花发育迟缓，果荚短小种子，进一步表明LbMYB103可能与植物的育性有关。该结果为进一步开展枸杞遗传转化，深入研究LbMYB103基因在枸杞花药发育过程中可能发挥的调控功能奠定了基础。