苹果果实β 半乳糖苷酶基因启动子的克隆与功能分析

根据已发表的苹果基因组序列设计特异引物，克隆得到苹果品种‘嘎拉’中β 半乳糖苷酶基因（Md gal）的启动子。序列分析表明，该启动子除含有大多数高等植物启动子具有的保守元件外，还含有大量光响应元件和与激素相关的顺式作用元件，主要有赤霉素响应元件（GARE motif和P box）、茉莉酸甲酯(MeJA)应答元件（CGTCA motif和TGACG motif）和生长素响应元件（TGA element）；构建5个不同长度Md gal启动子和GUS基因融合的瞬时表达载体，并进行苹果果实和烟草叶片转化试验，结果显示，5个启动子均具有启动子活性，在Md gal启动子序列中激活与抑制调节元件并存，正调控元件位于-1206~-754 bp区域，负调控元件位于-754~-597 bp区域；对Md gal启动子进行激素响应分析结果显示，激素处理可对其产生诱导作用，且MeJA处理后GUS活性最高。研究表明，Md gal启动子具有真核基因启动子的基本结构特征和正负调控特性，可响应外源激素处理，可能在苹果果实生长发育和成熟软化方面具有一定的作用。