丝氨酸蛋白酶抑制剂ea的表达纯化与活性分析

ea是一种植物来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂,分子量为18kd。利用其与丝氨酸蛋白酶家族成员的结合特性,可用于丝氨酸蛋白酶的结构与功能研究,也可作为亲和层析的配体而用于丝氨酸蛋白酶的纯化。将ea基因插入大肠杆菌表达载体pet11a,在bl21(de3)菌中以包涵体形式表达出重组蛋白质,表达量可占菌体蛋白质总量的30%。将包涵体变性、复性,得到具有天然抑制活性的rea。经两步纯化所得rea的纯度达到967%以上。活性分析表明,rea对胰蛋白酶和人组织型纤溶酶原激活剂均有抑制作用。制备成reasepharose亲和柱可有效结合胰蛋白酶。