人sapo2l-fc的分子构建及其在cho细胞中的表达

目的：构建人sapo2l-fc分子，在中国仓鼠卵巢细胞（cho）中表达有生物学活性的人apo2l-fc融合蛋白。方法：将sapo2l-fc基因克隆入pcdna3.1（+）表达载体，重组质粒转化大肠杆菌dh5α。挑取阳性克隆扩大培养，提取质粒进行酶切鉴定；采用脂质体法将重组质粒转入cho细胞，经g418加压筛选、elisa检测，挑选表达较高的阳性转化子扩大培养；表达的sapo2l-fc融合蛋白经proteina亲和柱纯化，纯化产物用sds-page、westernblotting检测样品的分子量及免疫原性，用l929细胞进行生物活性测定。结果：酶切鉴定及测序显示重组子构建与预想一致；elisa证实了sapo2l-fc融合蛋白在cho细胞中的表达；sds-page检测到纯化产物的分子量与理论分子量相符；在同样的位置，westernblotting显示阳性；l929细胞测定：纯化产物的生物学活性达1.0×105iu/mg。结论：构建了sapo2l-fc的表达载体，并成功地在cho中表达，表达的sapo2l-fc融合蛋白具有生物学活性。