球毛壳菌（chaetomium　globosum）过氧化物膜蛋白过敏原基因克隆、序列分析及原核表达

以球毛壳菌cdna文库中获得过氧化物膜蛋白（pero）基因片段（genbankaccn:bp099709）为基础，用race技术获得该基因的全长cdna序列。序列长747bp，由412bp的3′race产物和508bp的5′race产物拼接而成。开放阅读框501bp，编码166个氨基酸，蛋白分子量为17.5kd，理论等电点为5.75。利用cdna两侧非编码区序列作引物克隆出该基因的dna序列，序列分析表明该基因由2个内含子和3个外显子组成。clustalx多序列比对表明：该基因与粗糙脉孢菌（neurosporacrassa）的过氧化物膜蛋白过敏原同源性最高（83%）。将pero基因编码区克隆到原核表达载体pet28a中，构建成表达质粒pet28a-pero并转化大肠杆菌bl21，iptg诱导后sds-page检测表达情况,结果发现在21kd处有一特异性融合蛋白带,大小与预期相符，说明该基因已经在大肠杆菌中表达。克隆的cdna序列、dna序列及推测的氨基酸序列在genbank登录(登录号分别为ay555771，ay584753，aas66898)。