丹波黑大豆醛脱氢酶基因gmaldh3-1的克隆、原核表达和功能分析

醛是一类具有高度反应活性的毒性物质,在生物体中主要由膜脂过氧化,氨基酸氧化和蛋白质的糖基化产生。醛脱氢酶(aldehydedehydrogenase,aldh)是一类以多种醛类为底物的酶类,醛脱氢酶基因是一类编码将醛脱氢氧化为相应羧基酸的基因,在植物,动物和微生物中均有发现。通过rt-pcr方法从丹波黑大豆根中扩增出基因gmaldh3-1。构建原核表达载体pgex-4t-1-aldh3-1,在e.colibl21中表达,并研究不同浓度iptg、时间和温度对aldh3-1蛋白表达的影响,结果表明28℃下诱导6haldh蛋白表达量最大,而iptg浓度对aldh3-1的表达量影响不大。在添加有不同浓度al、cu和cd的液体lb培养基中培养转化菌和对照菌,检测转化菌和对照菌的生长曲线,生长曲线实验结果表明aldh3-1转化工程菌对上述金属离子具有一定的耐受性。这些结果为进一步研究其结构和生物学功能奠定了基础。