rb蛋白功能缺陷降低肝细胞对tgf-β的敏感性

目的：探讨肝细胞内视网膜母细胞瘤（rb）基因缺陷对转化生长因子-β（tgf-β）诱导的细胞周期静止的影响。方法：分离并培养原代肝细胞，特异性sirna腺病毒封闭细胞内rb基因表达后加入tgf-β诱导，然后mtt法检测细胞生长变化，流式细胞仪检测细胞周期变化，并用westernblot和荧光定量逆转录聚合酶反应（fq-rt-pcr）法检测细胞中prb、e2f、c-myc和p16的表达变化。结果：原代培养肝细胞感染rb-sirna重组腺病毒后，正常对照肝细胞抑制率高于rb基因封闭的肝细胞（69.76%，p<0.01），流式细胞检测可见对照组tgf-β诱导后处于g1期的肝细胞数明显增多（99.80%，p<0.05），而在rb基因封闭组中，tgf-β诱导后各细胞周期分布与未诱导的正常肝细胞基本一致。westernblotting检测可见48h时对照组tgf-β诱导后，e2f和c-myc蛋白表达减少而p16高表达，rb基因封闭组tgf-β诱导后c-myc表达减少而p16表达增高。结论：tgf-β可诱导肝细胞静止于g1期，而rb基因功能缺陷的肝细胞对tgf-β的诱导敏感性显著降低。