慢病毒介导nanog基因在小鼠es细胞的表达

试验尝试构建小鼠nanog基因慢病毒表达载体，培养表达外源nanog基因的小鼠es细胞。结果显示通过rt-pcr扩增出918bp的小鼠nanog基因，测序正确的小鼠nanog基因通过慢病毒介导在小鼠es细胞表达后，表达外源nanog基因的小鼠es细胞生长状态同普通es细胞无明显差异，在无lif的es细胞培养液培养条件下，表达外源nanog基因的小鼠es细胞保持正常的es细胞集落，碱性磷酸酶、oct4和ssea-1免疫细胞化学检测为阳性，相同情况下未表达外源nanog基因的小鼠es细胞集落退化消失。试验证实了通过慢病毒载体介导培养了表达外源nanog基因的小鼠es细胞。试验尝试构建小鼠nanog基因慢病毒表达载体，培养表达外源nanog基因的小鼠es细胞。根据小鼠nanog基因mrna序列设计nanog基因引物，引物两端带有nhei和xhoi酶切位点。trizol试剂处理小鼠es细胞，通过rt-pcr扩增出小鼠nanog基因，小鼠nanog基因用nhei和xhoi酶切后连入pcdna3.1载体中，pcr检测阳性的细菌克隆进行测序，测序正确的nanog基因片段连接入pll-ires-neo慢病毒表达载体中，包装含有nanog基因的慢病毒感染小鼠es细胞，在snl细胞饲养层上g418筛选2周后，添加普通es细胞培养液在普通小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上培养。结果显示通过rt-pcr扩增出918bp的小鼠nanog基因，测序正确的小鼠nanog基因通过慢病毒介导在小鼠es细胞表达后，表达外源nanog基因的小鼠es细胞生长状态同普通es细胞无明显差异，在无lif的es细胞培养液培养条件下，表达外源nanog基因的小鼠es细胞保持正常的es细胞集落，碱性磷酸酶、oct4和ssea-1免疫细胞化学检测为阳性，相同情况下未表达外源nanog基因的小鼠es细胞集落退化消失。试验证实了通过慢病毒载体介导培养了表达外源nanog基因的小鼠es细胞。