人ifn-β启动子基因报告质粒的构建及sars-cov3a和7a蛋白对ifn-β诱生作用的初步研究

3a蛋白和7a蛋白是sars-cov的非结构蛋白，分别主要由sars基因组中orf3a和orf7a所编码。在体内和体外感染病毒的细胞中均发现了有3a蛋白的表达。首先将pgl3-control载体进行了改构，除去了sv40启动子基因，获得了pgl3-enhancer载体，将获得的ifn-β启动子基因连入载体中，构建了带有人ifn-β启动子基因的荧光素酶报告质粒ip-21，并且通过实验证明所构建的质粒在干扰素的诱导剂ndv的作用下能够表达荧光素酶活性，照度计检测荧光素酶活性增强，从而验证了所构建的重组质粒的有效性。为了观察sars-cov非结构蛋白3a和7a对干扰素诱生途径的影响，将ip-21瞬转入稳定表达有3a和7a蛋白的cho细胞，通过荧光素酶的信号强弱对3a和7a的作用进行分析，结果表明sars-cov的3a和7a蛋白能够刺激荧光素酶的表达，即在体外的细胞实验中，3a和7a能有效地激活ifn-β的启动子部分。此结果对进一步研究3a和7a的功能以及对sars-cov的致病机制的进一步研究有一定意义。