soeing法在构建人瘦蛋白乳腺表达载体中的应用

目的:将奶牛csn25′端启动子区与人瘦蛋白cdna序列进行拼接,进而构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体。方法:设计特殊的“巨型引物”,运用pcr方法分别从质粒pbbc和phl上扩增了牛csn25′端启动子(28kb)和有完整读码框的人瘦蛋白基因。利用改进的重叠区扩增基因拼接法(soeing法),将两个独立的片断进行了拼接。结果:得到了两者线形融合基因,为构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体打下了基础。