小鼠淋巴细胞抗原ctla-4的胞外肽段表达及纯化

目的:真核细胞表达小鼠淋巴细胞抗原ctla-4胞外段肽,研究表达肽段与抗原呈递细胞b7分子结合后减轻小鼠淋巴细胞刺激后的增殖抑制,从而启动t淋巴细胞进一步增殖。方法:从小鼠脾脏淋巴细胞获得总rna,通过逆转录pcr扩增出ctla-4全长基因,克隆并测序。依据胞外段序列和真核表达载体pcdna3.1序列,合成引物扩增胞外片段,两者经内切核酸酶处理、连接构建重组表达pcdna3.1载体,重组质粒经测序验证后,采用lipofectamine2000转染入小鼠肝癌细胞hepa1-6,经g418筛选获得稳定表达细胞株。结果:获得小鼠ctla-4胞外段真核表达载体和小鼠肝癌细胞hepa1-6稳定表达转染细胞株,制备了ctla-4胞外肽段,经his标签抗体和小鼠ctla-4抗体westernblot检测表达蛋白带均呈阳性。结论:获得ctla-4胞外段肽,为进一步研究该肽的作用打下基础。