小鼠collectrin正反义真核表达载体的构建及其功能

？目的:构建新基因collectrin的正反义真核表达载体,研究其与细胞生长的关系.方法:以pcr的方法扩增collectrin的开放阅读框序列,与载体pcdna3.1/v5-his相连构成融合基因表达质粒.将重组后的质粒进行细菌转化,质粒扩增、纯化后,测序鉴定collectrin的正义及反义序列.以脂质体介导的方法体外转染肾皮质集合管细胞系(m-1).以β-galstaining的方法测定转染效率.分别行逆转录-pcr和westernblot,检测不同融合基因转染后细胞collectrinmrna和蛋白水平的表达变化.以四甲基偶氮唑蓝(mtf)参入法分别在第24小时、第48小时测定不同融合基因转染后细胞增殖活性.结果:m-1细胞在融合基因转染第24小时转染效率最高.collectrin正义转染组较反义、空载体和正常对照组在核酸和蛋白水平表达量都显著增高,collectrin反义转染组蛋白表达较其他组明显下调.反义转染组细胞较其他组明显减少.结论:成功构建了collectrin正义及反义真核表达载体,collectrin是维持细胞生长存活的重要元件.