人psmp重组蛋白在cho细胞中表达、纯化及功能鉴定

？目的：构建新的具有趋化作用的人类细胞因子psmp的真核表达载体，在仓鼠卵巢细胞(chinesehamsterovary,cho)中表达并纯化，为psmp的功能机制研究奠定基础。方法：从pcdna3.1-psmp-myc/his中切下psmp-myc/his片段，插入pmh3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染cho细胞，g418抗性筛选稳定克隆株。以dotblot及westernblot法检测上清液中psmp蛋白的表达，利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化，悬浮无血清大批培养工程细胞，通过镍亲和层析法纯化蛋白，sds-page电泳分析蛋白纯度，boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果：psmp-myc/his基因插入pmh3载体后成功构建真核表达载体pmh3-psmp，转染cho细胞后经2次克隆化获得稳定表达psmp的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白psmp纯度达95%以上且具有生物学活性。结论：成功构建了psmp蛋白的真核表达载体，并获得其稳定表达的cho细胞株，获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白，为下一步psmp功能和机制研究提供有用工具。